ترکیب باکتری‌های اندوفیت برگ چغندرقند در مناطق مهم چغندرکاری غرب کشور
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
باکتری‌های اندوفیت به باکتری‌هایی گفته می‌شود که در داخل گیاهان زندگی می کنند و علائم بیماری آشکاری را در میزبان ایجاد نمی کنند. در شرایط طبیعی هر گیاه می‌تواند میزبان یک و یا چندگونه باکتریایی باشد. تعدادی از این باکتری ها که به فراوانی از میزبان‌ها جدا می شوند و جمعیت غالبی دارند می توانند به‌عنوان باکتری های ساکن و اندوفیت برگ معرفی شوند. اخیراً، محققین تحقیقات خود را روی باکتری های اندوفیت به دلیل توانایی بالقوه این باکتری‌ها در بیوتکنولوژی، متمرکز کرده‌اند. در طول فصل زراعی سال 1393، از 12 منطقه مهم چغندرکاری غرب کشور بازدید به‌عمل‌آمده و نمونه های اندام های هوایی تعداد 23 گیاه شاداب و قوی به‌طور تصادفی با حرکت در قطرهای مزرعه گردآوری شد. پس از انتقال نمونه‌ها به آزمایشگاه، ابتدا برگ‌ها با اتانول 70 درصد ضدعفونی و سپس در محلول فسفات 10 درصد له شدند. پس از گذشت 30 تا 60 دقیقه قطراتی از سوسپانسیون نمونه ها در محیط کشت آگار مغذی دارای 3 گرم در لیتر عصاره مخمر کشت و در دمای 25 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. پس از رشد کلنی های باکتریایی، برحسب شکل ظاهری و رنگ کلنی از هر نمونه در هر پتری دیش تعداد 2 تا 3 کلنی انتخاب و روی محیط کشت مزبور خالص شدند. درمجموع 85 استرین باکتریایی به این روش جداسازی شد. برای انتخاب نماینده استرین-های باکتریایی ابتدا پروتئین های محلول سلولی استخراج و به روش ناپیوسته لاملی الکتروفورز شدند. درمجموع، 13 الکتروتیپ مختلف پروتئینی به این روش شناسایی شد. تعداد سه عدد از این الکتروتیپ ها (23 درصد کل الکتروتیپ ها) وقوع بالایی داشته و یک نماینده از هر الکتروتیپ انتخاب و با روش های استاندارد باکتری‌شناسی ویژگی های فنوتیپی آن ها تا حد شناسایی گونه بررسی شد. همچنین ژن های کد کننده 16S rRNA نماینده های هر یک از سه گروه با روش آزمون PCR با استفاده از آغازگرهای fD1 و rD1 فراوان سازی و پس از توالی یابی، با بانک داده های موجود در سایت NCBI با نرم‌افزار بلاست آنالیز و مقایسه شدند و به‌عنوان گونه‌های Acinetobacter calcoaceticus، Pseudomonas aeruginosa و Stenotrophomonas maltophilia شناسایی شدند. سایر الکتروتیپ ها وقوع پایین‌تری داشته و ویژگی فنوتیپی آن‌ها تا سطح جنس با استفاده از روش‌های استاندارد باکتری‌شناسی بررسی شد و این الکتروتیپ ها به ترتیب به‌عنوان جنس های Streptomyces sp،sp Acetobacter و Agrobacterium sp شناسایی شدند. به‌طورکلی نتایج این تحقیق نشان می دهد که الکتروفورز پروتئین‌های محلول سلول باکتریایی(SDS-PAGE) از روش های مناسب و کارآمد در جهت مطالعه و گروه بندی جمعیت های مختلف باکتریایی است. همچنین این اولین گزارش از وجود باکتری‌های اندوفیت برگ چغندر قند در مناطق عمده چغندر کاری غرب کشور است.
کلیدواژه ها