جداسازی یک تِرنکِرتوویروس جدید از زنجرک های ناقل در استان کرمان
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
جنس Turncurtovirus با سازمان ژنومی منحصربفرد، یکی از جنس‌های هفتگانه عضو خانواده Geminiviridae است و اعضای آن توسط زنجرک Circulifer haematoceps (Cicadellidae) به روش پایا وگردشی منتقل می‌شوند. ویروس‌های عامل پیچیدگی برگ شلغم در طبیعت، گیاهانی مثل شلغم، ترب، چغندرقند، چغندرلبویی، کاهو، بادنجان، اسفناج و ریحان را آلوده می کنند و از این گیاهان جداسازی شده اند. در این تحقیق، امکان جدا سازی این ویروس‌ها از بدن حشره ناقل نیز مورد بررسی قرار گرفت. به منظور انجام این تحقیق، جمع آوری زنجرک‌ها از مناطق ارزوئیه، جیرفت و سیرجان (استان کرمان) و ظفرآباد (استان فارس) انجام شد. به منظور ویروس در بدن حشرات جمع آوری شده از استان کرمان، ابتدا زنجرک ها از مزارع جمع آوری گردید و سپس بر اساس خصوصیات مورفولوژیک، زنجرک های C. haematoceps از بقیه جدا گردید. از زنجرک‌های جدا شده، استخراج دی‌اِن‌اِ با روش CTAB انجام شد. در مورد حشرات جمع‌آوری شده از استان فارس، استخراج به صورت انبوه و بدون توجه به جنس و گونه انجام شد. در ادامه با استفاده از روش دایره‌ی غلتان، ژنوم ویروس تکثیر گردد ولی به‌علت غلظت کم ویروس در دی‌اِن‌ایِ استخراج شده، از روش کمکی برای تکثیر موفق ژنوم ویروس استفاده شد. بنابراین، به‌منظور تغلیظ مقدار ژنوم ویروس، با استفاده ازکیت آر‌سی‌اِ، مولکول های حلقوی موجود در دی‌اِن‌ایِ استخراج شده تکثیر شد و سپس از پی‌سی‌آر برای ادامه تکثیر ژنوم استفاده گردید. برای این کار، با استفاده از محصول آر‌سی‌اِ به‌عنوان دی-اِن‌اِی الگو، آغازگرهای انتها به انتهای (TCTV-O-F, R)، آنزیم Pfx دی‌اِن اِ پلیمراز با صحت سنتز بالا و کیت Platinum® Pfx DNA Polymerase، طول کامل ژنوم ویروس در آزمون پی‌سی‌آر تکثیر شد. برای همسانه سازی، از پلاسمید خطی pJET1.2 با انتهای صاف و کیت CloneJET PCR Cloning Kit طبق دستورالعمل شرکت سازنده استفاده شد. در مورد حشرات جمع آوری شده از استان کرمان، تکثیر قطعه مرتبط به ویروس تنها در نمونه‌های C. haematoceps صورت گرفت. از دی‌اِن‌اِی استخراج شده از یک توده انبوه (حدود 100 تا 200 حشره)، در مجموع 11 جدایه متفاوت شامل یک جدایه از سیرجان، یک جدایه از جیرفت و نه جدایه از ارزوئیه تعیین ترادف شدند. همچنین، دو جدایه نیز از زنجرک‌های جمع آوری شده از استان فارس، تعیین توالی گردید. با مقایسه دو‌به‌دوی توالی نوکلئوتیدی طول کامل ژنوم 13 جدایه جدید با 46 جدایه موجود از ترنکِرتوویروس‌ها (1711 مقایسه)، مشخص شد که اعضای این جنس دارای تنوع بسیار زیادی می‌باشند. براساس نتایج حاصل از این تحقیق، جدایه‌های استان فارس همراه با دو نژاد B و C از گونه Turnip curly top virusطبقه بندی شدند و جدایه های استان کرمان به‌عنوان یک گونه جدید از جنس Turncurtovirus نسبت به دو گونه قبلی معرفی می گردند.
کلیدواژه ها