اولین گزارش قارچ Lentinus tigrinus به عنوان اندوفیت از برگ چای (Camellia sinensis) در استان گیلان
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
اندوفیت‌ها ارگانیسم هایی هستند که در قسمتی از زندگی خود داخل اندام های گیاه زندگی می کنند بدون اینکه به میزبان خود خسارت بزنند در این بررسی یک ایزوله اندوفیت از برگ های سالم، یکساله و بدون علائم گیاه چای (Camellia sinensis)از باغ چایی به قدمت بیش از 70 سال واقع در شهرستان سیاهکل از توابع استان گیلان با مختصات جغرافیایی 5/370734 N=و 5/0495201 E=، جداسازی گردید. به منظور جداسازی این ایزوله برگ‌های یکساله چای جمع آوری گردید و قسمت میانی آنها به موازات رگبرگ اصلی برش داده شد و سپس به منظور ضدعفونی سطحی، نمونه های تهیه شده طبق روش وانپینگ و همکاران (2013) به مدت نیم ساعت در داخل آب محتوی مایع ظرفشویی (دترجنت) قرار داده شدند و پس از آن با آب شیر شستشو داده شده و به مدت دو ساعت در ظرف محتوی آب شیر قرار گرفتند بعد در اتانول 75 درصد به مدت 30 ثانیه غوطه‌ور گردیده و پس از سه بار شستشو با آب مقطر استریل به مدت سه دقیقه در محلول هیپوکلریت سدیم 5/1 درصد قرار داده شدند و پس از آن پنج بار با آب مقطر استریل شستشو داده شده سپس با کاغذ صافی استریل آب گیری و بعد روی محیط کشت PDAکشت گردیدند آنگاه ظروف کشت داده شده در دمای 25 درجه سانتی گراد نگهداری گردیدند. زمانیکه میسلیوم هر ایزوله کل پتری را پر نمود مطالعات مورفولوژیکی که شامل تعیین خصوصیات ماکروسکوپی و میکروسکوپی بود صورت گرفت. DNA ژنومی قارچ مورد بررسی با استفاده از روش CTAB با اندکی تغییر جداسازی گردید بدین منظور ایزوله جداسازی شده در ظروف پتری محتوی PDA کشت گردیدند سپس میسلیوم آن از سطح ظروف پتری جمع آوری گردید و پس از استخراج ژنوم با استفاده از جفت پرایمر ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC)وITS1 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG)، منطقهITS گونه قارچی در PCR تکثیر گردید و پس از تعیین توالی محصول PCR توالی مشخص شده در BLAST مورد ارزیابی و شناسایی قرار گرفت. بر اساس خصوصیات مورفولوژیکی این ایزوله تولید میسلیوم سفید فشرده روی محیط کشت PDAنمود که به تدریج پس از گذشت پانزده روز از قسمت خارجی پرگنه به رنگ قهوه ای روشن در آمد و از آن ساقه ای مانند ساقه ماکروبازیدیومیست ها تولید گردید. در ارزیابی میکروسکوپی ما قوس اتصال را دیدیم براساس ارزیابی منطقه ITS دی.ان.ای ریبوزومی این ایزوله با شباهت 100% بعنوان Lentinus tigrinus شناسایی گردید و شماره دسترسی آن در بانک ژن NCBI نیز KC797150.1 بود. این اولین گزارش از وجود قارچ Lentinus tigrinus به‌عنوان اندوفیت روی گیاه چای می‌باشد.
کلیدواژه ها