بیان ژن فسفوپروتئین و 3 ویروس ایرانی موزاییک ذرت (Iran ,maize mosaic virus, IMMV) در باکتری Eschericha coli
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
Iran ,maize mosaic virus, IMMV متعلق به خانواده ی رابدوویریده (Rhabdoviridae) که به گیاهان غلاتی مانند برنج و ذرت خسارت می‌زند و اولین بار از ایران گزارش شده است. علایم ناشی از این بیماری به صورت خطوط ظریف زرد رنگ است که به طور موازی با هم در سطح برگ‌ها، مشاهده می‌شود و از طریق زنجرک هایی با نام های Laodelphax striatellus و Unkanodes tanasijevici منتقل می‌شود. براساس رابدوویروس های توالی یابی شده ژنوم IMMV دارای پنج ژن در حد فاصل بین پیش بر (l)و تریلر (t) شامل : ′3 l_ N(نوکلئوکپسید)، P (فسفوپروتئین)، M (ماتریکس)، G (گلیکوپروتئین) _t ′5 است. در IMMV از نقش دو ژن فسفو پروتئین و ژن 3 که در موقعیت X (میان P و N) قرار دارند، اطلاعی در دست نمی‌باشد. بمنظور همسانه سازی و بیان ژن های P و 3 ویروس IMMV پس از استخراج آر ان ای کل از گیاهان ذرت آلوده به ویروس IMMV و سنتز cDNA هر دو ژن P و 3با آغازگر های اختصاصی حاوی محل های برشی GAATTCوAAGCTT برای ژن P، GGATCC و GAGCTC برای ژن 3 در PCR محصولات مورد انتظار (قطعه 813 جفت بازی برای P و قطعه 830 جفت بازی برای ژن 3) تکثیر شدند. پس از خالص سازی، این قطعات در پلاسمید pET-28a همسانه سازی شد. این قطعات پس از هضم آنزیمی از ناقل pET-28a بازیابی و به ناقل بیان pQE30 انتقال یافتند. سپس پلاسمید‌های نوترکیب به سلول های باکتری E coli سویه ی DE3 منتقل شدند و سلول های باکتری تراریخت شده به مدت 3 ساعت در محیط کشت حاوی 500 میکرولیتر IPTG در دمای 37 درجه ی سانتی گراد جهت القای بیان ژن مورد نظر کشت گردیدند. پروتئین کل استخراج و بررسی بیان پروتئین های مورد مطالعه از طریق الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید حاوی SDS، بیانگر وجود باند‌‌های پروتئینی با اندازه‌های 36 و 70 کیلو دالتون بترتیب برای ژن های P و 3 بود. آزمون لکه گذاری وسترن بلات صحت بیان دو پروتئین تولید شده را تایید نمود. خاموشی ژن یکی از مکانیسم های دفاعی گیاه در برابر هجوم پاتوژن ها می‌باشد. در پژوهش‌های متعدد پروتئین‌هایی با نقش‌های سرکوبگری در ویروس‌های مختلف نشان داده شده‌اند. با توجه به این که در تعدادی از رابدو ویروس ها نقش فسفوپروتئین (p) در سرکوبگری خاموشی اثبات شده است، می توان در IMMV فسفو پروتئین را نیز بعنوان یک کاندید برای سرکوبگری خاموشی ژن در نظر گرفت. با بیان این پروتئین ها در این پژوهش، مقدمه ای برای انجام آزمایشات بعدی جهت مشخص شدن نقش این دو پروتئین فراهم گردید.
کلیدواژه ها