شناسایی و بررسی اثر آنتاگونیستی جدایه Pantoea agglomerans در برابر بیماری آتشک سیب و گلابی در مازندران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
بیماری آتشک(Fire Blight) از بیماری های خطرناک درختان میوه دانه دار در سراسر دنیاست و موجب سوختگی(نکروز) وسیع و سریع بافت‌های رویشی و زایشی می‌گردد . بیمارگر Erwinia amylovora به گیاهان تیره گل‌سرخیان و به ویژه به زیر خانواده Pomoideae خسارت قابل توجهی را وارد می کند. در بهار سال 1394، ۲۰۰ جدایه باکتری از بافت شکوفه‌ی سالم درختان سیب در باغ‌های حومه جمع آوری و به آزمایشگاه آورده شدند؛ نمونه‌ها هر یک به چند تکه خرد گردیده و در ارلن‌های جداگانه حاوی ۱۰۰میلی‌لیتر آب مقطر استریل و ۱میلی‌لیتر توئین ۴۰ روی تکان‌دهنده الکتریکی چرخشی به مدت ۳۰ دقیقه در سرعت متوسط قرار گرفت. پس از خالص سازی، آزمون‌های فیزیولوژیک، بیوشیمیایی و مورفولوژیک روی جدایه‌ها انجام گرفت. همچنین اثر بازدارندگی یک گروه از جدایه‌ها با آزمون هاله بازدارنده(آنتی بیوز)، اندازه‌گیری هاله بازداری از رشد آن‌ها در محیط کشت جامد، هاله بازداری از رشد پیرامون قرص کاغذی(Disk diffusion) و تولید آنتی بیوتیک بررسی شد. به منظور تعیین حداقل غلظت بازدارندگی(MIC) جدایه‌ها، پالیده(Cell free supernatant) کشت یک شبه آن‌ها در غلظت‌های متفاوت و پایین‌تر مورد ارزیابی قرار گرفت. جدایه‌های دارای توانایی بازداری از رشد بالا، کروی شکل، گرم منفی، بی هوازی اختیاری، کاتالاز مثبت و اکسیداز منفی بودند. در روی محیط YDCرنگدانه زرد تولید کردند کلونی آن‌ها در روی محیط کشت EMB دارای سایه سبز متالیک بود. در محیط کشت کینگ-ب(King s B) قادر به تولید رنگدانه فلورسنت نبودند. از سیستئین گاز H2s تولید و نیترات را به نیتریت احیا کردند، اسکولین و ژلاتین را هیدرولیز کرده اما قادر به هیدرولیز آرژنین و‌اوره نبودند. جدایه‌های بررسی شده از قند‌های ال-آرابینوز، دی-آرابیتول، مالتوز، رامنوز، سوکروز، ترهالوز، زایلوز استفاده کردند، ولی توانایی مصرف قند‌های ملی‌بیوز، دی- سوربیتول، آدونیتول، ال-آرابیتول، زایلیتول، لاکتوز، دولیسیتول و آرابیتول را نداشتند. روی محیط آگار غذایی حاوی ٪۲ نمک طعام رشد نمودند اما در غلظت ٪۳ نمک طعام رشد آن‌ها متوقف شد. بر پایه خصوصیات فنوتیپی، نقوش الکتروفورزی پروتئین‌های سلولی مقایسه شده با یک جدایه مرجع P.agglomerans موجود در بخش گیاهپزشکی ساری، شباهت بالای چند جدایه با گونه P.agglomerans مشخص گردید، قطعه‌ای از ژن 16S rRNA یک جدایه نماینده(جدایهApk 30 )، با بهکارگیری یک جفت آغازگر عمومی (FD1, RD1) با PCR تکثیر و توالی آن‌ها توسط شرکت (Bioneer, Korea) تعیین و با توالی نواحی مشابه در ژن بانک(GenBank) مقایسه شد که مشخص ساخت توالی نوکلئوتیدی جدایه‌ی یاد شده بالاترین شباهت (٪۹۸) را با توالی جدایه‌های P.agglomerans موجود در ژن بانک داشت. جدایه‌های دارای قابلیت آنتاگونیستی علیه عامل آتشک سیب و گلابی به خوبی با بهکارگیری روش تولید هاله‌ی بازدارنده (آنتی بیوز) تعیین گردیدند و مشخص شد که آنتی بیوز می‌تواند یک مکانیسم مهم در کنترل بیولوژیک بیماری آتشک باشد. توانایی آن‌ها در پیشگیری از بیماری آتشک در شرایط گلخانه در دست بررسی است.
کلیدواژه ها