جدا سازی و شناسایی باکتری Pseudomonas tolaasii عامل بیماری لکه قهوه‌ای قارچ تکمه ای در استان کردستان
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
قارچ تکمه‌ای ((Agaricus bisporus به دلیل ارزش تغذیه‌ای بالا از مهمترین محصولات باغبانی بوده و اهمیت تجاری قابل ملاحظه‌ای دارد. لکه قهوه‌ای باکتریایی یک بیماری بسیار مخرب برای قارچ تکمه‌ای است و در بیشتر مناطق پرورش قارچ دنیا وجود دارد. قارچ بیمار علائمی بصورت لکه‌های کوچک قهوه‌ای، سوختگی قهوه‌ای و کلاهک‌های پوسیده که حالت لزج و چسبناکی دارد را نشان می‌دهند. در تابستان سال 1394 ضمن بازدید از سالن‌های پرورش قارچ تکمه‌ای در استان کردستان (سنندج و دهگلان) از قارچ‌های مشکوک دارای علائم بیماری لکه قهوه‌ای نمونه برداری صورت گرفت و نمونه ها پس از قرار گرفتن در کیسه‌های مجزا با ذکر نام محل و تاریخ جمع آوری جهت انجام مراحل بعدی به آزمایشگاه منتقل شدند. بافت آلوده پس از شستشو با آب مقطر داخل محلول هیپوکلریت سدیم نیم درصد به مدت 30 ثانیه نگهداری و سپس توسط آب مقطر سترون در دو مرحله شستشو انجام شد قارچ‌های مشکوک به بیماری لکه قهوه‌ای در 3-2 میلی لیتر آب مقطر سترون به قطعات کوچک خرد گردید. قطراتی از سوسپانسیون حاصله بر روی محیط کشت King B agar کشت و به مدت 3 تا 4 روز در درجه حرارت 28- 26 درجه سانتی گراد نگهداری گردید. کلنی های رشد یافته باکتری عامل بیماری سپس جدا سازی و خالص سازی گردید و براساس آزمون‌های استاندارد باکتری شناسی مورد شناسایی قرار گرفت. جدایه ها دارای واکنش مثبت در آزمون‌های اکسیداز، آرژنین دی هیدرولاز، هیدرولیز ژلاتین و لیسیتیناز و واکنش منفی در آزمون گرم، تولید لوان، احیای نیترات و دی نیتریفیکاسیون بودند. همچنین با استفاده از روش PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن 16S rDNA قطعه DNA به اندازه تقریبی 1500 جفت باز تکثیر و تعیین توالی گردید. توالی نوکلئوتیدی بدست آمده در صورت لزوم تصحیح و با استفاده از برنامه Blast n با سایر سویه های استاندارد موجود در NCBI مقایسه گردید. نتایج نشان داد که درتوالی نوکلئوتیدی ژن 16S rDNA نمونه های مورد مطالعه دارای 99% شباهت با Pseudomonas tolaasii بود. برای انجام آزمون بیماری‌زایی 10 میکرولیتر از سوسپانسیون باکتری بیمارگر با غلظت تقریبی 106 سلول بر میلی لیتر به قطعات بریده و ضد عفونی شده کلاهک قارچ تکمه‌ای در شرایط سترون تزریق گردید. سویه های بیماری‌زا پس از 24 ساعت نگهداری کلاهک ها در دمای 28 – 26 درجه سانتی گراد علائمی بصورت لکه‌های قهوه‌ای فرو رفته و لزج روی کلاهک ها ایجاد کردند. این بیماری برای اولین بار از استان کردستان گزارش میگردد.
کلیدواژه ها