استخراج بازدارنده های پروتئینی از Dature straminium (Solanacea)و D. metel و بررسی اثرات بازدارندگی آن در تریپسین گوارشی کرم غوزه پنبه Helicoverpa armigera Hubner
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
1ندارد
2ستاد تمام و عضو هیت علمی دانشگاه تبریز
چکیده
کرم غوزه ی پنبه، Helicoverpa armigera (Hubner) (Lep: Noctuidae)، از مهمترین آفات پنبه و ذرت است که بسیار پلی فاژ بوده و پراکنش جهانی دارد. مقاومت این حشره به پایروتیروئیدها ، اورگانوفسفات ها و کاربامات ها از کشورهای مختلفی مانند استرالیا، چین، هند، پاکستان و ترکیه گزارش شده است. در حشرات گیاه خوار، غیرفعال کردن آنزیم های گوارشی بوسیله مهارکننده ها، توانایی گوارشی لاروها و حشرات کامل را با بلوکه کردن آمیلازها و پروتئازهای لوله گوارش کاهش می دهد که منجر به مرگ و میر، تاخیر در رشد و نمو، کاهش تغذیه و کاهش باروری می شود. بدین منظور حشرات در ظروفی مناسب روی غذای مصنوعی تخت شرایط دمای 1±25 درجه سلسیوس، رطوبت نسبی 5±70 درصد و دوره نوری 16 ساعت روشنایی و 8 ساعت تاریکی پرورش داده شدند. برای جلوگیری از هم خواری، لاروهای سن 3 به ظروف شیشه ای (3 × 9 cm) منتقل شده و تا شفیرگی بصورت انفرادی پرورش یافتند. بعد از تشریح لارو سن آخر، روده میانی جدا شده و هوموژنیت تهیه شد، رونشین حاصل از سانتریفیوژ هموژنیتها به عنوان منبع آنزیم مورد استفاده قرار گرفت. بذور D. straminium و D. metel متعلق به خانواده ی Solanacea از شرکت پاکان بذر اصفهان تهیه گردید و سپس آسیاب شدند. 30 گرم از هر کدام از بذور آرد شده با 150 میلی لیتر آب مقطر حاوی NaClیک مولار در دمای 4 درجه سلسیوس به مدت 2 ساعت هم زده شد. عصاره پروتئینی حاصل با اشباع سازی با سولفات آمونیوم 20، 40، 60 و 80 % و سپس دیالیز استخراج شد. عصاره آنزیمی و عصاره مهارکننده پروتئینی در محیط بافری Tris-Hcl (8 : pH؛ 05/0 مولار) با هم اثر داده شد و پس از انکوباسیون در دمای محیط، سوبسترای BApNA نیز افزوده شد. هم چنین فعالیت مهارکننده در اسیدیته ها (2-12) و دماهای مختلف (20-70 ) بررسی شد. سنجش فعالیت مهارکنندگی در طول موج 405 نانومتر توسط میکروپلیت ریدر تعیین گردید. در نتیجه، میزان مهارکنندگی تریپسین تیمار شده با عصاره پروتئینی بذر D. metel 96 ، 65 ، 33، و 65 % و برای بذرD. straminium 90 ، 72 ، 67، و 45 % به ترتیب اشباع سازی با سولفات آمونیوم 20، 40، 60 و 80 % به دست آمد. نتایج بدست آمده با اسیدیته های مختلف نیز نشان داد که پایداری مهارکننده در اسیدیته های 7-11 و حداکثر پایداری در اسیدیته 8 بود. برای آزمایش بررسی فعالیت مهارکننده در دماهای مختلف نیز نتایج بدست آمده نشان داد که فعالیت مهارکننده در دماهای 35- 45 درجه سلسیوس پایدار بود و حداکثر پایداری در دمای 37 درجه ثبت شد و از دماهای 50 درجه به بالا اثر مهارکننده به طور معنی داری کاهش پیدا کرد. افزایش دما می تواند منجر به اختلال
پیوندها در ساختار سه بعدی پروتئین شود.
پیوندها در ساختار سه بعدی پروتئین شود.
کلیدواژه ها