اثر خاموشی ژن Met در ویتلوژنسیس ماده‌های بالغ Blattella germanica
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
سوسری آلمانی، Blattella germanica (L.) (Blattaria: Blattellidae)، یک آفت مهم شهری در دنیا و ایران است. این گونه بعلت استفاده از هر گونه محصولات کشاورزی در انبارها و مناطق مسکونی و انتقال انواع بیماریها، باعث خسارت شدید اقتصادی می‌شود. اکثر تکنیک‌های کنترلی عمدتا بر اساس استفاده از حشره‌کش‌های شیمیایی است. بعلت هزینه های بالای اقتصادی و محیطی حشره‌کش‌ها و گسترش جمعیت‌های مقاوم به حشره‌کش‌ها، گسترش استراتژی‌های مدیریتی جدید آفت بر اساس IPM ضروری است. در سال‌های اخیر، تداخل در RNA (RNAi) پتانسیل زیادی در کنترل آفات حشره‌ای از طریق خاموشی ژن‌های حیاتی نشان داده است. RNAi یک فرایند سلولی است که در آن بیان ژن هدف به‌طور اختصاصی از طریق معرفی dsRNA باز داشته می‌شود. (Met) Methoprene-tolerant رسپتور هورمون جوانی (JH) است و در مسیر سیگنالینگ JH نقش ضروری دارد. برای تعیین نقش Met در ویتلوژنسیس، میزان mRNA Met با استفاده از RNAi سیستمیک سرکوب شد. کلونی سوسری آلمانی روی غذای خشک سگ (Panlab 125C3) و آب درتاریکی در دمای 1±30 درجه سانتی‌گراد و رطوبت نسبی 70-60 درصد پرورش یافت. دز 2 میکروگرم dsMet به شکم ماده‌های بالغ تازه ظاهر شده تزریق شد و مجددا این ماد‌ه‌ها در روز سوم با dsMet تیمار شدند. ماده‌هایی که با دز مشابه با dsMock تیمار شدند بعنوان شاهد استفاده شدند. اثرات dsRNA در روز پنجم ماده‌های بالغ بررسی شد. استخراج RNA کل از اجسام چربی و سنتز cDNA انجام شد. واکنش های Quantitative real time PCR (qRT-PCR) در سه تکرار با استفاده از SYBR Green انجام شد. میزان mRNA نسبت به بیان ژن BgActin-5c با استفاده از دستگاه iQ5 Real-Time PCR Detection System تعیین شد. داده‌ها با استفاده از آزمون T و نرم افزارهای Rest (2009) و اکسل آنالیز شدند. نتایج نشان داد که تزریق dsMet به ماده‌های بالغ باعث سرکوبی موثر Met mRNA شد و بیان Met در مقایسه با شاهد، 67 درصد کمتر بود. متعاقبا Met RNAi موجب کاهش معنی‌دار میزان بیان ژن‌های پایین دست Met نظیر kr-h1 و E93 در اجسام چربی ماده‌های بالغ پنج روزه گردید و همچنین میزان Vg mRNA را در اجسام چربی به طرز شدیدی کاهش داد. از لحاظ فنوتیپی Met RNAi باعث کاهش معنی دار پروتئین کل تخمدان، رشد اووسیت‌های پایه، اندازه تخمدان و تولید کیسه تخم در مقایسه با شاهد گردید. بنابر‌این Met برای انتقال سیگنال ویتلوژنیک JH در اجسام چربیB. germanica ضروری است. با توجه به نقش کلیدی هورمون جوانی در ویتلوژنسیس و مطالعات RNAi روی عملکرد ژن‌های احتمالی دخیل در مسیر سیگنالینگ ویتلوژنیک هورمون جوانی، Met میتواند ژن کاندید مناسبی به عنوان جایگاه هدف بالقوه برای کنترل B. germanica با استفاده از تکنیکRNAi در آینده باشد.
کلیدواژه ها