جداسازی و شناسایی Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum و Phellinus tuberculosus بر روی درختچه ارژن (Amygdalus wendelboi Freitag) در ایران
عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
به منظور شناسایی فلور قارچی همراه با بیماری های شاخه و تنه برخی از درختان مناطق کوهستانی در استان کرمان، مطالعه ای بر روی درختان ارژن (ارچن) در منطقه سرچشمه انجام گردید. نمونه برداری از شاخه های درختان بیمار که دارای نشانه های بیماری به شکل مرگ شاخه ها، شانکر، سرخشکیدگی و همچنین نشانه های داخلی بیماری به صورت تغییر رنگ و پوسیدگی بافت چوب بودند انجام شد. با تهیه برش های طولی و عرضی از نمونه های جمع آوری شده نوع تغییر رنگ بافت چوب مورد بررسی بیشتر قرار گرفت. برای جداسازی عوامل قارچی قطعات کوچکی از بافت چوب و از مرز بین بافت تغییر رنگ یافته یا پوسیده و بافت سالم جدا و به مدت سه دقیقه در محلول 5/1 درصد هیپوکلریت سدیم گند زدایی و دو مرتبه با آب استریل شستشو داده شدند. قطعات سترون شده بر روی محیط کشت عصاره مالت-آگار (MEA) دارای 5/ میلی گرم بر لیتر از سولفات استرپتومیسین (MEAS) کشت داده شدند. محیط های کشت در دمای °C 25 و تاریکی نگهداری گردیدند. جدایه های قارچی که از قطعات کشت داده شده رشد کردند جهت شناسایی به محیط کشت جدید منتقل شدند. جدایه های به دست آمده بر اساس ویژگی های ریخت شناختی و محیط کشت شناسایی شدند. شناسایی جدایه های انتخاب شده با روش های مولکولی نیز مورد تایید قرار گرفت. برای این کار کل DNA با استفاده از کیت AccuPrep®Genomic DNA Extraction Kitو بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده از میسلیوم جدایه ها استخراج گردید. DNA استخراج شده بر روی ژل آگاروز 7/% مشاهده و برای مراحل بعدی کار در دمای °C 20 - نگهداری گردید. شناسایی ظاهری جدایه ها با تکثیر و تجزیه و تحلیل بخشی از ژن بتا توبولین (BT) با استفاده از دو آغازگر T1 و Bt2b و ناحیه ITS با به کارگیری دو آغازگر ITS1 و ITS4 مورد تایید قرار گرفت. در این مطالعه 12 جدایه از یک گونه Phaeoacremonium از شاخه های آلوده که در برش عرضی دارای تغییر رنگ بافت چوب بودند جداسازی شد. بر اساس ویژگی های ریخت شناختی و مولکولی (ژن بتا توبولین) این جدایه ها Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum تشخیص داده شدند. از نواحی بافت چوب با نشانه های پوسیدگی نیز 21 جدایه از یک قارچ بازیدیومیست جداسازی گردید. این جدایه ها سرعت رشد نسبتا بالایی داشتند و پرگنه آنها در ابتدا سفید و با گذشت زمان به رنگ قهوه ای دیده شدند. بر اساس ویژگی های ریخت شناختی و مولکولی (ITS) این جدایه ها به عنوان Phellinus tuberculosus شناسایی شدند. این مطالعه اولین گزارش از دو گونه P. fraxinopennsylvanicum و Ph. tuberculosis بر روی A. wendelboi می باشد.
کلیدواژه ها