اولین گزارش از وجود Phaeoacremonium spp روی درختچه‌ پیچ امین الدوله (Lonicera nummulariifolia)

عنوان دوره: بیست و دومین کنگره گیاهپزشکی ایران

راحیل قاسمی سردره؛ حمید محمدی؛ همایون فرهمند

تیره پلم، آقطی یا پیچ امین الدوله (Caprifoliaceaea) نزدیک به 40 جنس و بیش از 400 گونه دارد. جنس Lonicera دارای شش گونه درختچه‌ای در ایران است. اخیرا زوال شدیدی بر روی درختچه پیچ امین الدوله (Lonicera nummulariifolia) در برخی از مناطق کوهستانی سرچشمه در استان کرمان مشاهده شده است. با این وجود هنوز عامل بیماری بررسی و مشخص نشده است. در تلاشی که برای شناسایی قارچ های بیمارگر شاخه و تنه این گیاه انجام شد، از شاخه درختان بیمار با نشانه‌های کم برگی، زردی، سرخشکیدگی، شانکر و زوال کامل نمونه برداری شد. برای مشاهده تغییر رنگ بافت چوب، برش های عرضی از شاخه‌های بیمار تهیه شد و نوع بافت نکروز مورد بررسی قرار گرفت. عمل جداسازی از حاشیه بافت‌های نکروز شده و سالم بافت چوب انجام شد. قطعات چوب جدا شده به مدت 5/1 تا دو دقیقه در محلول 5/1 درصد هیپوکلریت سدیم ضدعفونی سطحی و سه مرتبه با آب استریل شستشو داده شدند. قطعات سترون شده بر روی محیط کشت عصاره مالت-آگار (MEA) دارای 100 میلی گرم در لیتر از محلول سولفات استرپتومایسین کشت داده شدند. تشتک‌های پتری در دمای °C 25 و تاریکی نگهداری شدند. ویژگی‌های پرگنه و تولید رنگدانه جدایه‌ها نیز بعد از 8 و 16 روز بر روی محیط کشت‌های MEA، عصاره سیب زمین آگار (PDA) و عصاره یولاف آگار (OA) در دمای °C 25 مورد بررسی قرار گرفت. جدایه‌های Phaeoacremonium به دست آمده در این مطالعه بر اساس خصوصیات پرگنه و ویژگی‌های میکروسکوپی شامل نوع و شکل فیالید، شکل کنیدیوفور، اندازه و شکل کنیدیوم‌ها و همچنین اندازه زگیل‌های روی ریسه و با توجه به کلیدهای شناسایی موجود شناسایی شدند. DNA ژنومی از توده میسلیومی جدایه‌هایی که بر اساس ویژگی‌های ریخت شناختی به عنوان Phaeoacremonium شناسایی شده بودند، توسط کیت AccuPrep®Genomic DNA Extraction Kit استخراج شد. DNA به دست آمده بر روی ژل آگاروز 1% مشاهده و برای انجام PCR در دمای °C 20- نگهداری گردید. شناسایی مورفولوژیکی جدایه‌های Phaeoacremonium با تعیین ترادف بخشی از ژن بتاتوبولین (TUB2) و با استفاده از دو آغازگر T1 و Bt2b مورد تایید قرار گرفت. به طور کلی 61 جدایه قارچی شامل جدایه‌های شبه Phoma (پنج جدایه)، Fusarium spp. (19 جدایه)، Acremonium spp. (هشت جدایه)، اعضای ناشناخته خانواده Diatrypaceae (سه جدایه)، Phaeoacremonium spp. (18 جدایه) و سایر قارچ‌های فیالیددار (هشت جدایه) از درختچه های پیچ امین الدوله با نشانه‌های بیماری جداسازی گردید. بر اساس داده-های ریخت شناختی و مولکولی جدایه‌های Phaeoacremonium به دو گونه Phaeoacremonium minimum (پنج جدایه) و Phaeoacremonium alvesii (13 جدایه) تعلق دارند. بر اساس منابع موجود، این مطالعه اولین گزارش از Phaeoacremonium spp. روی درختچه پیچ امین الدوله می‌باشد.

ژن بتا توبولین؛ استان کرمان؛ بیماری های قارچی شاخه و تنه