تولید آنتی بادی چند همسانه ای علیه ویروس Xسیب زمینی با استفاده پروتئین پوششی نوترکیب
عنوان دوره: بیست و یکمین کنگره گیاه پزشکی ایران
نویسندگان
چکیده
ویروس X سیب زمینی (PVX) از خانواده Alphaflexiviridae و جنس Potexvirus یکی از رایج ترین و گسترده ترین ویروس های آلوده کننده سیب زمینی در جهان می باشد. به دلیل گسترش این ویروس در ایران و با توجه به خسارت اقتصادی آن در نقاط مختلف، شناسایی و ردیابی این ویروس با استفاده از روش های با صرفه تر ضروری می باشد. تولید آنتی بادی چندهمسانه ای شده از طریق روش های مولکولی، با استفاده از تولید آنتی بادی نوترکیب و با هدف تسهیل فرآیند شناسایی سرولوژیکی ویروس، می تواند در شناسایی این ویروس مفید در طبیعت باشد. بر این اساس، در این بررسی یک نمونه سیب زمینی آلوده به این ویروس از مزارع کشت سیب‌زمینی در زرند استان کرمان جمع آوری و آلودگی آن نسبت به PVX توسط آزمون DAS-ELISA تائید گردید. جدایه مذکور جهت تکثیر، بر روی توتون (Nicotiana glutinosa) مایه‌زنی گردیدند. پس از استخراج آر اِن اِ از گیاه آزمون با استفاده از واکنش RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش برای آنزیم های برشی، توالی پروتئینی پوششی (CP) ویروس تکثیر و در ناقل بیان پروکاریوتی (pQE60) همسانه سازی گردید. سپس پلاسمید نوترکیب بدست آمده به باکتری Escherichia coli سویه M15، منتقل شد. پس از القای بیان، پروتئین مورد نظر استخراج و با تکنیک SDS-PAGE در ژل پلی آکریلامید 5/12% مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل بیانگر آن است که وزن مولکولی باند حاصله در آزمون SDS-PAGE با وزن مولکولی پروتئین پوشش (kDa 24) با استفاده از نرم افزار آنلاین ExPASy مطابقت دارد. همچنین بیان پروتئین پوششی ویروس در تکنیک دات بلات نیز تائید گردید.
کلیدواژه ها