شناسایی، جداسازی، کلونینگ و توالی یابی ژن کیتین سنتاز در سن گندم Eurygaster integriceps Puton (Hemiptera: Scutelleridae)
عنوان دوره: بیست و یکمین کنگره گیاه پزشکی ایران
نویسندگان
استاد دانشگاه تهران
چکیده
سن گندم Eurygaster integriceps Puton (Hemiptera: Scutelleridae) آفت کلیدی گندم در ایران وکشورهای همسایه میباشد که خسارت شدید کمی و کیفی به گندم وارد میکند. علیرغم اهمیت جهانی آن، منابع توالی ژنومی سن گندم کمیاب است. هدف از مطالعه حاضر جداسازی،کلونینگ و تعیین توالی ژن کیتین سنتاز سن گندم میباشد. برای این منظورRNA کل از تخمهای 5 روزه با استفاده ازTri-Reagent (Sigma) جداسازی شد. cDNA تک رشته‌ای با استفاده ازکیت AccuPower® RocketScriptTM Cycle RT PreMix (Bioneer) طبق دستورالعمل کارخانه ساخته شد. این cDNA با استفاده از الیگوپرایمرهای دجنریت به دست آمده از نواحی حفاظت شدۀ کیتین سنتاز همیپتراهای دیگر، مستقیما برای PCR استفاده شد. محصول خالص سازی شده پی سی آر با استفاده ازpTG19-T kit (Vivantis) کلون شده و سپس با استفاده از پرایمرهای عمومی M13 و T7 از هر دو طرف توالی یابی شد. آنالیز نتایج نشان داد که برای کیتین سنتاز یک فرگمنت cDNA با 573 جفت باز تکثیر شد. مقایسه توالی DNA با پایگاه اطلاعاتی اسید نوکلئیک در GenBank با استفاده از BLASTn انجام شد. جستجو در پایگاههای اطلاعاتی نشان داد که توالی نوکلئوتیدی ژن کیتین سنتاز سن گندم همانندی با ژن کیتین سنتاز همیپتراهای دیگر مانندAnasa tristis (Coreidae) و Aphis glycines (Aphididae) را نشان میدهد. مطالعه حاضر، برای اولین بار توالی کیتین سنتاز E. integriceps را فراهم میکند که مبنایی برای استفاده از آن برای مطالعات بیشتر میباشد.
کلیدواژه ها