شناسایی، جداسازی، کلونینگ و توالی یابی ژن سیستئین در سن گندم Eurygaster integriceps Puton (Hemiptera: Scutelleridae)
عنوان دوره: بیست و یکمین کنگره گیاه پزشکی ایران
نویسندگان
استاد دانشگاه تهران
چکیده
سن گندم Eurygaster integriceps Puton (Hemiptera: Scutelleridae) آفت کلیدی غلات در مناطق وسیعی از جهان بوده و با تغذیه از برگ، ساقه و بذر سبب خسارت شدید کمی و کیفی (گاهی تا 100%) به محصول میشود. علیرغم اهمیت جهانی آن، منابع توالی ژنومی سن گندم کمیاب است. در این مطالعه، برای اولین بار ژن سیستئین سن گندم که آنزیم سیستئین را کد میکند کلون و توالی یابی شد. برای این منظورRNA کل از غدد بزاقی و گات حشرات کامل سن گندم با استفاده ازTri-Reagent (Sigma) جداسازی شد و cDNA تک رشته‌ای با استفاده از کیت AccuPower® RocketScriptTM Cycle RT PreMix (Bioneer) طبق دستورالعمل کارخانه ساخته شد. این cDNA با استفاده از الیگوپرایمرهای دجنریت به دست آمده از نواحی حفاظت شدۀ سیستئین همیپتراهای دیگر، مستقیما برای PCR استفاده شد. محصول PCR با استفاده ازکیتpTG19-T (Vivantis) کلون شده و سپس با استفاده از پرایمرهای عمومی M13 و T7 از هر دو طرف توالی یابی شد. آنالیز نتایج نشان داد که برای سیستئین یک فرگمنت cDNA با 501 جفت باز تکثیر شد. مقایسه توالی DNA با پایگاه اطلاعاتی اسید نوکلئیک در GenBank با استفاده از BLASTn انجام شد. سیستئین سن گندم 83-68% همانندی با دیگر ژنهای سیستئین شناخته شده داشت. بیشترین شباهت به سیستئین همیپترا Riptortus pedestris (83% همانندی) وجود داشت. همچنین شباهت سیستئین سن گندم به ژن سیستئین Triatoma brasiliensis (80%)،Rhodnius prolixus (79%)، Maconellicoccus hirsutus (73%)،Lygus lineolaris (70%) و Plautia stali (68%) بود. بررسی بیان این ژن در کانال گوارشی و غدد بزاقی نشان داد که این ژن فقط در کانال گوارشی سن گندم بیان میشود ولی در غدد بزاقی سن گندم این ژن بیان نمیشود بنابراین میشود نتیجه گیری کرد که این ژن در شکستن گلوتن گندم و از بین بردن خاصیت نانوایی گندم نقشی ندارد.
کلیدواژه ها